乳癌および胃癌の組織または細胞中のHER2遺伝子増幅の検出

ベンタナ独自の技術であるSilver in situ Hybridization法をベースとしたDual Color in situ Hybridization法により、腫瘍組織中のHER2遺伝子およびHER2遺伝子が局在する第17番染色体を、
黒色（HER2遺伝子）と赤色（第17番染色体）のシグナルとしてそれぞれ検出します。

製品特性

• 光学顕微鏡下でのシグナル観察が可能
• ベンタナ社の自動染色システムにより、シグナル検出までの全工程を自動化
• 腫瘍組織の形態学的特徴とシグナルの同時観察を実現

反応原理（模式図）

標本上のHER2遺伝子および第17番染色体のセントロメアにジニトロフェノール（DNP）標識HER2 DNAプローブとジゴキシゲニン（DIG）標識Chromosome 17 DNA プローブとのカクテルプローブを同時にハイブリダイゼーションさせます。次に、抗DNP 抗体とペルオキシダーゼ（HRP）標識抗体を反応させると、標本上にDNP標識HER2 DNAプローブ－抗DNP ウサギモノクローナル抗体－HRP標識抗ウサギIgヤギ ポリクローナル抗体の結合物が形成されます。この結合物のHRPに酢酸銀（発色試薬A）、ハイドロキノン（発色試薬B）を過酸化水素（発色試薬C）とともに添加すると、酵素反応により標本上のHER2が黒色に染色されます。続いて、抗DIG抗体とアルカリフォスファターゼ（AP）標識抗体を反応させると、DIG標識Chr17 DNA プローブ－抗DIG マウスモノクローナル抗体－AP標識抗マウスIg ヤギポリクローナル抗体の結合物が形成されます。この結合物のAPに、ナフトールAS-TR（Naphthol試薬）、ファーストレッドKL塩（Fast Red試薬）を塩化マグネシウム（pHエンハンサー試薬）とともに添加すると、酵素反応により、標本上のChr17が赤色に染色されます。

染色結果の判定

IHCで陽性を示した領域で20個の腫瘍細胞を観察し、Chr17（赤色）のシグナル総数に対するHER2（黒色）のシグナル総数の比を算出します。シグナル比が1.8未満を増幅なし、2.2以上を増幅ありと判定します。シグナル比1.8-2.2のものに関しては、境界域（Equivocal）とし、さらに20細胞のシグナルを追加で計測し、合計40細胞でのシグナル比を算出します。その結果、2.0以上を増幅あり、2.0未満を増幅なしと判定します。